灵芝多糖药理

灵芝多糖：体内抗肿瘤作用与免疫调节作用

20世纪70年代，日本学者#!先发现灵芝水提取物和灵芝多糖体内给药对动物移植性肿瘤有显著的抑制作用，并提出灵芝的抗肿瘤作用是“宿主中介性的”，可能是通过增强机体的免疫功能而实现的。经一系列研究证明：灵芝水提取物及其所含多糖肽灌胃可抑制小鼠移植性肿瘤S180、人肺癌（PG）、Lewis肺癌的生长，但直接加到体外培养的S180或人白血病细胞的培养液中，对肿瘤细胞生长无抑制作用。提示灵芝在体内抑制肿瘤生长的作用确实是“宿主中介性的”，增强机体的抗肿瘤免疫力可能是其中重要的一环。

随后的研究证明，灵芝多糖肽可直接作用于单核巨噬细胞、树突状细胞和细胞毒T-细胞，增强其功能。促进TNF-αmRNA和IFN-γmRNA表达，增加TNF-α和IFN-γ生成，也促进IL-1和IL-6等细胞因子生成，增强细胞因子的活性，从而抑制肿瘤细胞增殖，诱导肿瘤细胞凋亡，最终杀死肿瘤细胞。

灵芝多糖：增强细胞因子诱导的杀伤细胞活性

继应用淋巴因子活化的杀伤细胞（LAK细胞）于肿瘤的过继免疫治疗之后，将人外周血淋巴细胞在体外与多种细胞因子共培养后，获得一群异质细胞即细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK），具有增值力强、杀瘤活性高、杀瘤谱广、对多重耐药肿瘤细胞同样敏感等特点，且明显优于LAK细胞，比LAK细胞更适合于肿瘤的过继免疫治疗。是新一代抗肿瘤过继细胞免疫治疗的首选方案。有研究者按常规方法制备小鼠的CIK细胞[小鼠脾细胞培养中加入IFN-γ（1000kU/L）、抗CD3单抗（50mg/L）、IL-2（300Ku/L）和IL-1（100Ku/L）]，当培养中加入灵芝多糖（Gl-PS）（100和400μg/ml）后，可明显降低CIK细胞培养中的白介素-2（IL-2）和抗CD3单抗的用量（分别为未加灵芝多糖的对照组的75%和50%）。但与对照组相似，能诱导和大量扩增CIK细胞，且此CIK细胞在体外杀伤YAC-1和P815肿瘤细胞的杀伤率亦与常规对照组无明显差异。同样将此CIK细胞静脉输注给荷S180或荷H22肝肉瘤小鼠后，其体内抗肿瘤疗效与常规CIK细胞治疗组比较亦无差异。研究者还发现，灵芝多糖在降低抗CD3单抗和IL-2用量50%和75%的条件下，能促进CIK细胞颗粒酶B以及穿孔素mRNA和蛋白的表达。这表明灵芝多糖通过增加颗粒酶B和穿孔素的表达，从而增强CIK细胞杀伤肿瘤细胞的活性。研究者的试验还证明，淋巴细胞表面的补体3型（CR3）受体介导灵芝多糖对CIK细胞的作用。

灵芝多糖：抗化疗药及放射损伤作用

1、抗化疗药损伤作用

化疗药顺铂可引起严重的呕吐反应，在给异食癖大鼠腹腔注射顺铂24、48、72和96小时后，可见异食癖大鼠摄食高岭土明显增加，这反映了顺铂有引起恶心与呕吐的作用。给异食癖大鼠注射1、3和10mg/kg灵芝多糖提取物可剂量依赖性地减少顺铂引起的摄食高岭土增加。此外，灵芝提取物还可剂量依赖性地改善顺铂引起的大鼠摄食减少，改善机体的一般状态。

有研究也证明，给小鼠腹腔注射顺铂可增加小鼠高岭土摄取量和脑内c-fos基因的表达产物Fos蛋白的表达水平，腹腔注射灵芝多糖（150mg/kg）可减少小鼠对高岭土的摄取量并降低脑内Fos蛋白的表达水平，Fos蛋白表达水平可能与顺铂所致恶心、呕吐的程度有关。这一结果也进一步说明灵芝多糖对顺铂所致异食癖小鼠的恶心、呕吐有抑制作用，此作用可能与灵芝多糖抑制脑内Fos蛋白表达有关。

2、抗放射损伤作用

1980年，有研究发现灵芝有抗放射线损伤作用。在60Coγ射线照射前和照射后2周，给小鼠灌胃灵芝液（10g/kg）20日，能显著降低动物的死亡率。灵芝组和对照组照射后30日的死亡率分别为44.4%和70.4%。照射后给药，对照射后30日死亡率无明显影响，但可使死亡动物的平均存活时间明显延长。

研究者推测灵芝对放射性损伤的保护作用可能与其促进骨髓造血功能有关。进一步的研究证实了这种推测。腹腔注射灵芝多糖D6，可使3H-亮氨酸、3H-胸腺嘧啶核苷和3H-尿嘧啶核苷分别参入骨髓细胞蛋白质、DNA和RNA的掺入量较对照组增加28.5%、43.3%和48.7%，说明灵芝多糖能促进骨髓细胞蛋白质、核酸的合成，加速骨髓细胞的分裂增殖。研究还证明，灵芝多糖肽是灵芝抗放射线损伤及化疗药损伤的有效成分。

灵芝多糖：抑制肿瘤细胞黏附和移动

观察灵芝对人恶性乳腺癌（MT-1）细胞黏附的影响。结果发现，灵芝孢子或灵芝子实体提取物对癌细胞黏附具有较强的抑制作用，进一步纯化的灵芝多糖也抑制癌细胞黏附到各种基质分子上。

灵芝子实体或孢子粉提取物可抑制高侵袭性乳腺癌细胞MDA-MB-231和前列腺细胞PC-3的转录因子NF-KB和AP-1活化，并抑制这两种肿瘤细胞的尿激酶型血纤维蛋白原活化因子（uPA）及其受体（uPAR）的表达，从而抑制MDA-MB-231和PC-3细胞移动。

曹琦珍等在体外用不同浓度灵芝多糖肽（Gl-PP）处理人肺癌PG细胞后，应用细胞增殖实验、细胞划痕运动实验、细胞黏附实验、金属蛋白酶活性测定实验及RT-PCR法测定金属蛋白酶MMP-9mRNA的表达，观察Gl-PP对肿瘤生长、运动、黏附及金属蛋白酶MMP-9活性和mRNA表达的影响。结果发现，Gl-PP对人肺癌PG细胞增殖无直接抑制作用；金属蛋白酶MMP-9活性呈剂量依赖性下降，100mg/LGl-PP对MMP-9活性抑制率可达41.53%，MMP-9mRNA的表达也受到不同程度的抑制。已知具有转移能力的肿瘤细胞能直接分泌或者通过诱导宿主基质细胞分泌胶原酶降解细胞外基质（ECM），基质金属蛋白酶MMP是人体内降解ECM的主要蛋白酶家族，其活性是影响肿瘤细胞侵袭和转移的重要因素之一，衡量药物对肿瘤细胞分泌金属蛋白酶水平的影响是评价该药物抗侵袭作用的一个重要方面。金属蛋白酶MMP-9可能是灵芝多糖肽作用的重要靶点，灵芝多糖肽通过抑制MMP-9表达其活性，可抑制人肺癌PG细胞的侵袭性。

灵芝多糖：翻转肿瘤细胞对抗肿瘤药的多药耐药性

有研究证明灵芝多糖（Gl-PS）对多柔比星抑制体外培养的敏感人白血病细胞株K562细胞的半数抑制浓度（IC50）无明显影响，但可明显降低多柔比星对多药耐药的人白血病细胞株K562/ADM细胞的IC50，加入Gl-PS5、10、20和40ml/L分别使K562/ADM细胞对多柔比星的敏感性增强2.96、6.46、6.80和3.35倍。可见灵芝多糖明显翻转K562/ADM细胞对抗肿瘤药多柔比星的耐药性，恢复其对多柔比星的敏感性。在激光共聚焦显微镜下，可见K562/ADM细胞内多柔比星的蓄积明显低于敏感的K562细胞，加入灵芝多糖可使K562/ADM细胞内多柔比星的蓄积恢复到与敏感的K562细胞相似的水平。进一步的研究证明，Gl-PS翻转K562/ADM对多柔比星的耐药性与其下调肿瘤细胞的P-糖蛋白（P-gp）和多药耐药相关蛋白（MRP1）的表达相关。多药耐药肿瘤细胞P-gp和MRP作为一种转运泵，可将抗肿瘤药从肿瘤细胞内泵至细胞外，从而降低抗肿瘤药的杀伤力，产生耐药性。

随后，美国学者也报告了灵芝提取物可增敏依托泊苷和多柔比星对敏感的人小细胞肝癌细胞H69或多药耐药的人小细胞肺癌细胞VPA的抑制作用，翻转具有多药耐药性的人小细胞肺癌细胞VPA对抗肿瘤药依托泊苷和多柔比星的耐药性。这些结果可从不同角度解释灵芝与肿瘤化疗药协同作用的机制。

灵芝多糖：抑制肿瘤血管新生

实体瘤的生长完全依赖自身的血液供应，直径1-2mm的肿瘤单纯依靠弥散获取氧气及营养物质，但是直径>2mm的肿瘤已不能单纯依靠弥散获取氧气及营养物质，如果没有新毛细血管生成，肿瘤组织将保持休眠状态或发生退化。肿瘤的进一步发展就是要产生新的血管。一旦新的血管长入肿瘤，肿瘤的血液供应由弥散获取变为通过血管灌注。新生的肿瘤血管可持续不断地为肿瘤细胞提供营养及氧气，带走肿瘤代谢产物，肿瘤不断发展。在无血管生成时，肿瘤极少发生转移。新生的微血管长入肿瘤后，肿瘤开始浸润或转移，肿瘤微血管数量越多，肿瘤细胞进入血液循环的机会就越大。肿瘤新生血管结构缺乏完整性，管壁薄弱，仅排列一层内皮细胞，缺乏平滑肌，基底膜变薄或者缺如，使它们比正常成熟血管更容易被肿瘤细胞穿透。此外，血管生成本身就具有一定的组织侵袭性。肿瘤细胞还可释放血浆蛋白酶原激活剂和胶原酶，诱导组织纤维蛋白的形成，进而形成肿瘤细胞转移所必需的基质，使游离的肿瘤细胞通过基质迁移进入血液循环，在远离肿瘤的部位形成转移灶。许多研究发现，随着肿瘤微血管密度的增加，肿瘤侵袭转移也明显增加。故肿瘤微血管密度可以被认为是预测肿瘤转移、复发和预后的一项指标。

研究发现，灵芝多糖肽不能抑制体外培养的人肺癌PG细胞增殖，但给裸小鼠灌胃（50、100、200mg/kg）可剂量依赖性地抑制移植性人肺癌PG细胞的生长。由于裸小鼠是T细胞免疫缺陷动物模型，因此，灵芝多糖肽的体内抗肿瘤作用可能不是通过免疫机制介导的，推测可能与抑制血管生成有关。

建立裸鼠移植性人肝肿瘤模型，采用随机区组设计法随机分为空白对照组、阳性对照组及灵芝孢子粉组，观察裸鼠肿瘤生长。采用苏木精-伊红染色法、SP免疫组织化学法及病理ImageproPlus5.0彩色图像定量分析法检测裸鼠肿瘤组织中血管内皮生长因子和微血管密度。结果指出，灵芝孢子粉组及5-氟尿嘧啶阳性对照组裸鼠移植瘤体积的增长速度均明显小于对照组，第4周灵芝孢子粉组和对照组裸鼠移植瘤的平均体积分别为0.420cm3和0.896cm3，抑制率为57.0%。镜下观察，灵芝孢子粉组与对照组相比，肿瘤坏死组织较多，细胞异型性较小。灵芝孢子粉组血管内皮生长因子（VEGF）、微血管密度表达水平较空白对照组有明显下降。结果指出，灵芝孢子粉对肝肿瘤有明显抑制作用，并能抑制肿瘤新生血管生成，其机制可能与抑制VEGF表达有关。

最近发现松衫灵芝甲醇提取物（GTME）在体外可抑制人表皮状癌A-431细胞生长，并增强紫杉醇对人表皮状癌A-431细胞增殖的抑制作用。GTME在体外还抑制表皮生长因子受体（EGFR）和血管内皮因子（VEGF）的表达，并抑制人脐静脉内皮细胞的毛细血管形成。表皮生长因子（EGF）可拮抗GTME所致VEGF表达的抑制。体内给予GTME也能抑制A-431异种移植肿瘤在裸鼠体内生长，并抑制EGFR和VEGF的表达。这些结果指出，GTME通过抑制EGFR表达而抑制VEGF表达，并导致下调人表皮状癌A-431细胞分泌VEGF，最终抑制肿瘤血管的生成，抑制肿瘤生长。因此，表皮生长因子受体（EGFR）是灵芝抗肿瘤作用的重要靶点之一。灵芝甲醇提取物的这一作用与目前临床应用的表皮生长因子酪氨酸激酶抑制剂类靶向抗肿瘤药如吉非替尼（易瑞沙）相似，可抑制某些肿瘤增殖与转移。